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摘要: ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪 双抗体夹心法:(1)包被:用0.05M PH9稀释抗体。碳酸砷包被缓冲液,直...

ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪

双抗体夹心法:(1)包被:用0.05M PH9稀释抗体。碳酸砷包被缓冲液,直至蛋白含量为1 ~ 10 g/ml。将0.1ml加入每块聚苯乙烯板的反应孔中,在4过夜。第二天,丢弃井中的溶液,用洗涤缓冲液洗涤3次,每次3分钟。(简称洗,下同)。(2)加样:向包被的反应孔中加入0.1ml稀释的待测样品,37孵育1小时。然后洗。(同时制作空白孔、阴性对照孔和阳性对照孔)。(3)加入酶标抗体:在每个反应孔中加入0.1ml新鲜稀释的酶标抗体(滴定后稀释)。37孵育0.5 ~ 1小时,洗涤。(4)加入底物溶液显色:在37下,在10 ~ 30分钟内,向每个反应孔中加入0.1ml临时配制的TMB底物溶液。(5)停止反应:在每个反应孔中加入0.05毫升2M硫酸。(6)结果判断:可在白底上用肉眼直接观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应无色或极浅,根据颜色深浅用“、”表示。可测量的OD值:在ELISA检测器上,在450nm处(ABTS为410nm),用空白对照孔调零后,测量每个孔的O D值。如果大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,则为阳性。间接法:用包被缓冲液将已知抗原稀释至1 ~ 10 g/ml,每孔加入0.1ml,4过夜。第二天洗三次。向包被的反应孔中加入一定量的稀释样品(未知抗体)0.1ml,37孵育1小时,洗涤。(同时对照空白、阴性和阳性孔)向反应孔中加入0.1ml新鲜稀释的酶标二抗(抗抗体),37孵育30-60分钟,洗涤,最后一次用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”第4、5、6步。

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不是质量问题,是保存不当。霉菌:氨基酸是霉菌的良好营养物质。阿胶表面沾有霉菌孢子时,在温度和湿度适宜的情况下,胶块表面会形成天然的霉菌培养基,促使孢子快速生长,出现形状不一的白色菌丝,产生霉变。变色变味:存放过程中,胶块发霉、颜色变深、味道变臭等。引起恶心、呕吐等不适,甚至过敏反应。这主要是因为阿胶吸湿后,动物蛋白在霉菌和酶的作用下腐烂分解,产生游离氨或挥发性碱性低链羟胺、芳香胺等碱性含氮物质。这些物质有臭味,导致阿胶发臭,这种阿胶不能再入药。阿胶最简单的保存方法是放入可食用的包装袋中,扎紧口,然后放入冰箱保存。

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